- régénérée la gélose VF par ébullition au bain-marie bouillant pendant environ 30 minutes.

- ensemencer lorsque le milieu est encore liquide, vers 45°C. L'ensemencement se fait à la pipette Pasteur scellée (ou boutonnée) et chargée. On introduit la pipette Pasteur au fond du tube et on remonte en spirale.

Ne pas visser le bouchon à fond, sinon on empêche la formation du gradient de O2.

- refroidir à l’eau courante,

- on place ensuite le tube à l'étuve (à 37°C) pendant 24 heures.

Þ Type aéro-anaérobie : culture en présence et en absence de  di-xoygène. La technique utilisée ne permet pas de différencier entre les bactéries aéro-anaérobies facultatives et les bactéries anaérobies aéro-tolérantes. On conclut type aéro-anaérobie.

Þ Type anaérobie strict : culture uniquement en l'absence de di-oxygène.

Þ Type micro-aérophile : culture seulement dans une zone de pression faible en di-oxygène.