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Nitrate réductase

En l’absence d’oxygène, certaines bactéries peuvent obtenir leur énergie par respiration anaérobie. Cette respiration anaérobie est liée à l’activité d’enzymes localisées dans la membrane plasmique bactérienne.

Technique

La recherche va s’effectuer :

- soit à partir de milieu gélosé nitraté,

  • soit à partir de bouillon nitraté à 10 g.dm-3,
  • soit à partir du milieu mannitol mobilité,
  • cupule GLU galerie API 20E.

- Après lecture des milieux, ajouter à la surface du milieu 3 gouttes d’acide sulfanilique puis 3 gouttes d’alpha naphtylamine.

- Mélanger, observer.

                Technique rapide

- réaliser une suspension très dense de la bactérie à étudier dans 0,5 mL de solution de nitrate potassium à 10 g/L

- incuber 2 h à 37°C

- ajouter 1 à 2 gouttes des réactifs , mélanger, observer.

- l’utilisation du zinc ne semble pas possible en un temps aussi court.

Caractères recherchés Nitrate réductase
Résultats Þ   Le milieu devient rouge : présence de nitrites. Donc la bactérie possède une nitrate réductase. Résultat NR+

Þ Le milieu reste inchangé : on ajoute alors de la poudre de zinc qui joue le même rôle que la nitrate réductase vis à vis des nitrates.

Þ Coloration rouge : on a donc eu  transformation des nitrates en nitrites par le zinc. La bactérie ne possédait pas cette enzyme. Résultat NR-

Þ Pas de coloration : les nitrates ont été transformés par la bactérie au delà des nitrites. La bactérie possède cette enzyme. Résultat NR+


Aspect du test négatif
Aspect du test positif

© Copyright P.Y. Guillaume 2004